Bicinchoninsyre assay

Den bicinchoninsyre assay, også kendt som Smith assay efter opfinderen, Paul K. Smith på Pierce Chemical Company, er en biokemisk assay til bestemmelse af den samlede koncentration af protein i en opløsning, der svarer til Lowry protein assay Bradford protein assay eller biuret reagens. Den samlede proteinkoncentration udvises af en farveændring af prøveopløsningen fra grøn til lilla i forhold til proteinkoncentration, som derefter kan måles under anvendelse af kolorimetriske teknikker.

Mekanisme

En bestand BCA opløsning indeholder følgende ingredienser i en stærkt alkalisk opløsning med en pH 11,25:

  • Bicinchoninsyre
  • Natriumcarbonat
  • Natriumbicarbonat
  • Natriumtartrat
  • Cuprisulfat-pentahydrat

BCA analysen primært bygger på to reaktioner.

Først peptidbindingerne i proteinet reducere Cu-ioner fra cuprisulfat til Cu. Mængden af ​​Cu reduceret er proportional med mængden af ​​protein til stede i opløsningen. Dernæst to molekyler af bicinchoninsyre chelat med hver Cu-ion, der danner en lilla-farvet produkt, som stærkt absorberer lys ved en bølgelængde på 562 nm.

Den bicinchoninsyre Cu-kompleks påvirkes i proteinprøver ved tilstedeværelsen af ​​cystein / cystin, tyrosin og tryptophan sidekæder. Ved højere temperaturer, peptidbindinger hjælpe med dannelsen af ​​reaktionsproduktet. Inkubering af BCA assay ved højere temperaturer anbefales som en måde at øge analysesensitivitet samtidig minimere varianserne forårsaget af ulige aminosyresammensætning.

Mængden af ​​protein til stede i en opløsning kan kvantificeres ved at måle absorptionsspektre og sammenligning med protein af kendt koncentration.

  0   0
Forrige artikel Baron Hunsdon
Næste artikel Darshaan

Kommentarer - 0

Ingen kommentar

Tilføj en kommentar

smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile
Tegn tilbage: 3000
captcha